GPR4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-435597-LAC

O gene **Gpr4** em camundongos codifica o **GPR4**, um receptor acoplado à proteína G sensível a prótons que detecta a acidificação extracelular e se acopla às vias de sinalização de **cAMP** e **Rho** para modular o comportamento de células endoteliais e imunes. A ativação de GPR4 influencia o tônus vascular, a função de barreira, o tráfego de leucócitos e a expressão de genes inflamatórios por meio de vias que podem convergir com programas regulados por **MAPK** e **NF-κB**. Como a acidose tecidual é uma característica comum da hipóxia e da inflamação, o GPR4 é frequentemente estudado em contextos como respostas ao estresse associadas à isquemia, microambientes inflamatórios crônicos e remodelamento vascular associado a tumores. Essas funções tornam o GPR4 um ponto útil para dissecar a sinalização dependente de pH e adaptações transcricionais em modelos murinos e sistemas celulares relevantes.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR4 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gpr4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR4 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gpr4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gpr4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.