GPR20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407471-ACT

GPR20 codifica um receptor órfão da classe A acoplado à proteína G (GPCR), predominantemente associado à biologia neuronal e neuroendócrina, no qual se acredita que molde a sinalização mediada por receptores que influencia a dinâmica de AMP cíclico, a atividade de MAPK e programas transcricionais a jusante. Como GPCR de membrana, o GPR20 pode modular a comunicação célula–célula e redes de sinalização responsivas a estímulos que coordenam diferenciação, excitabilidade e processos secretórios em contextos celulares relevantes. A sinalização de GPCR alterada está amplamente implicada em fenótipos neuropsiquiátricos e metabólicos, tornando o GPR20 um alvo útil para dissecar a conectividade de vias e estados regulatórios impulsionados por receptores. Assim, o GPR20 humano é de interesse para estudos mecanísticos de transdução de sinal associada a GPCR e para mapear efeitos em redes gênicas em sistemas modelo relevantes para doenças.

GPR20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR20 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR20 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR20, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR20 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR20 em células tumorais com expressão de GPR20 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.