Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR19: sc-407000-ACT

GPR19 codifica un receptor acoplado a proteína G (GPCR) huérfano que se expresa en múltiples tejidos y se ha relacionado con la regulación de redes de señalización celular que configuran programas transcripcionales, el estado de diferenciación y la fisiología sensible al estrés. Como receptor de membrana, GPR19 está en una posición idónea para influir en vías acopladas a GPCR como la señalización de AMPc/PKA y MAPK, con efectos posteriores sobre la expresión génica y la homeostasis celular. La alteración de la señalización de GPCR tiene una relevancia amplia para la regulación metabólica, la neurobiología y la modulación inmunitaria, y se han investigado cambios en la expresión de GPR19 en contextos que incluyen la inflamación y fenotipos asociados al cáncer. La modulación de los niveles endógenos de GPR19 permite estudios mecanísticos de la dinámica de señalización impulsada por el receptor y del “cross-talk” entre vías en modelos celulares humanos.

GPR19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR19 en células tumorales con expresión de GPR19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.