GPR158 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407138-ACT

GPR158 (receptor acoplado à proteína G 158) é um GPCR órfão de classe C, enriquecido no sistema nervoso e associado à regulação da excitabilidade neuronal, da sinalização sináptica e de respostas neuroendócrinas. É frequentemente descrito como um modulador do tipo “scaffold” (plataforma) de vias de GPCR, capaz de influenciar os resultados de sinalização relacionados a cAMP/PKA e programas transcricionais a jusante. Alterações na expressão de GPR158 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e à sinalização relacionada ao estresse, e também têm sido investigadas no contexto da biologia tumoral e da regulação do crescimento celular. Essas características tornam o GPR158 um alvo útil para investigar redes de sinalização ligadas a receptores, mecanismos de plasticidade neuronal e adaptações transcricionais ao estresse celular.

GPR158 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR158 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR158 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR158 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR158, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR158. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR158 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR158 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR158 em células tumorais com expressão de GPR158 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.