GPR14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402393-ACT

UTS2R (GPR14) codifica o receptor humano de urotensina II, um GPCR de classe A que se liga à urotensina II e a peptídeos relacionados para regular o tónus vasomotor e a contratilidade celular. A ativação do receptor envolve proteínas G heterotriméricas para desencadear a sinalização da fosfolipase C, a mobilização de Ca2+ intracelular e as vias MAPK/ERK e RhoA/ROCK a jusante, que influenciam a função do músculo liso e as respostas proliferativas. A expressão e a sinalização de UTS2R têm sido investigadas na biologia cardiovascular e renal, incluindo contextos ligados à remodelação vascular, a vias associadas à hipertensão e a respostas ao stress cardiometabólico. Além disso, a atividade de GPR14 tem sido estudada em redes de sinalização neuroendócrinas e inflamatórias, nas quais programas transcricionais mediados por GPCR moldam alterações no estado celular.

GPR14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UTS2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UTS2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UTS2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UTS2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR14 em células tumorais com expressão de UTS2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.