GPR120 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437271-ACT

Ffar4 codifica o receptor acoplado à proteína G GPR120 do camundongo (também conhecido como FFAR4), um receptor sensor de lipídios ativado por ácidos graxos de cadeia longa e ômega-3. O GPR120 acopla-se principalmente às vias de Gαq/11 e de β-arrestina para modular a sinalização intracelular de cálcio, a atividade de ERK/MAPK e programas de transcrição que influenciam a produção de citocinas e a homeostase metabólica. Ele é expresso em tecidos metabolicamente ativos e relacionados ao sistema imune, conectando a detecção de nutrientes à função de adipócitos, à polarização de macrófagos e às respostas enteroendócrinas intestinais. A desregulação da sinalização de FFAR4 tem sido associada à inflamação e a fenótipos metabólicos, tornando-o um alvo útil para o estudo de vias relacionadas à obesidade, mecanismos de sensibilidade à insulina e imunometabolismo mediado por lipídios em modelos murinos.

GPR120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ffar4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR120 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ffar4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ffar4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR120. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ffar4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR120 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR120 em células tumorais com expressão de Ffar4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.