GPNMB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402966-ACT

GPNMB (proteína B de melanoma não metastático, glicoproteína) é uma glicoproteína transmembranar do tipo I enriquecida em células da linhagem mieloide e em populações melanocíticas, nas quais contribui para a adesão celular, migração e remodelamento tecidual. Está implicada em processos associados a lisossomos e endossomos e pode modular a sinalização inflamatória e a função de células apresentadoras de antígeno por meio de interações com a matriz extracelular e parceiros reguladores do sistema imune. Alterações na expressão de GPNMB foram relatadas em diferentes contextos, incluindo a biologia do melanoma, neuroinflamação, fibrose e remodelamento do microambiente tumoral–imune, o que a torna um marcador útil e um nó mecanístico em estudos de adaptação ao estresse e de programas de diferenciação celular. In vitro, a regulação de GPNMB é frequentemente estudada em conjunto com vias que controlam a polarização de macrófagos, a atividade de osteoclastos e fenótipos do tipo transição epitélio–mesênquima.

GPNMB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPNMB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPNMB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPNMB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPNMB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPNMB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPNMB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPNMB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPNMB em células tumorais com expressão de GPNMB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.