GPI-PLD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404938-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GPI-PLDO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GPI-PLD (h) e o Plasmídeo Double Nickase GPI-PLD (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GPLD1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GPI-PLD Anticorpo (D-10): sc-365096
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GPI-PLD Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPI-PLD Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPLD1 codifica a fosfolipase D1 específica de glicosilfosfatidilinositol (GPI-PLD), uma enzima secretada que hidrolisa âncoras de GPI e regula a liberação de proteínas ancoradas em GPI das membranas celulares para compartimentos extracelulares. Ao modular a associação à membrana de diversas proteínas ancoradas em GPI, a GPI-PLD pode influenciar a sinalização célula–célula, processos relacionados ao sistema imune e o tráfego de proteínas ligadas a lipídios entre tecidos. A expressão de GPLD1 e a atividade circulante de GPI-PLD têm sido investigadas no contexto da biologia metabólica e inflamatória, incluindo associações com resistência à insulina, vias relacionadas ao fígado e modulação imune sistêmica. Essas conexões funcionais tornam o GPLD1 um alvo útil para estudos mecanísticos sobre a renovação de âncoras de GPI, a atividade enzimática extracelular e a remodelação do proteoma.
GPI-PLD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GPLD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GPLD1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GPLD1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GPLD1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.