GPD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403706

概要

ヒトのGPD1は、細胞質型グリセロール-3-リン酸デヒドロゲナーゼ1をコードしており、NADH依存性酵素としてジヒドロキシアセトンリン酸とグリセロール-3-リン酸の相互変換を触媒します。これにより、解糖系とグリセロ脂質合成、およびレドックスバランスの維持が結び付けられます。グリセロールリン酸シャトルへの関与や、トリグリセリド／リン脂質前駆体の産生を通じて、GPD1は細胞質のNAD+/NADH恒常性、エネルギー代謝、脂質貯蔵プログラムに影響を及ぼします。GPD1活性の変化は、肝臓および脂肪組織における代謝リモデリングと関連付けられており、脂質異常症、インスリン抵抗性に関連する経路、さらにミトコンドリア—細胞質間の広範なレドックス連関の観点から研究されています。これらの機能により、GPD1は、栄養ストレスやホルモンシグナル下で、解糖系と脂質生合成の間における炭素フラックスの配分を調べるための有用な結節点となります。

GPD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPD1の機能に不可欠なGPD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPD1 HDRプラスミド（h）および GPD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。