GPD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403706-ACT

O GPD1 humano codifica a glicerol-3-fosfato desidrogenase 1 citosólica, uma enzima dependente de NADH que interconverte di-hidroxiacetona fosfato e glicerol-3-fosfato, acoplando o metabolismo de carboidratos à biossíntese de lipídios. Essa atividade sustenta a naveta do glicerol-3-fosfato, contribui para a homeostase redox e fornece glicerol-3-fosfato para a formação de triglicerídeos e fosfolipídios. Por seu papel na interface entre a glicólise, o metabolismo de glicerolipídios e o equilíbrio celular NADH/NAD+, o GPD1 ajuda a modular o fluxo metabólico sob estresse nutricional e hipóxico. Vias associadas ao GPD1 desreguladas têm sido relacionadas na literatura a fenótipos metabólicos envolvendo o manejo hepático de lipídios e uma homeostase energética mais ampla, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de regulação metabólica.

GPD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPD1 em células tumorais com expressão de GPD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.