GP78 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423842-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GP78 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GP78ダブルニカースプラスミド（m）およびGP78ダブルニカースプラスミド（m2）は、Amfrを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GP78 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423842-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GP78 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423842-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Amfr は、小胞体（ER）に局在する E3 ユビキチンリガーゼである GP78 をコードしており、ミスフォールドしたタンパク質や過剰なタンパク質をユビキチン化してプロテアソーム分解へ導くことで、ER 関連分解（ERAD）の中核的構成因子として機能する。GP78 は E2 酵素や p97/VCP などの因子と協調し、ER 基質タンパク質の逆輸送（retrotranslocation）と除去を制御することで、プロテオスタシスを維持し、ER ストレスシグナルを抑制する。ユビキチン依存的な品質管理における役割を通じて、GP78 は脂質代謝、ミトコンドリア恒常性、ストレス適応応答に関連する経路にも影響を及ぼす。GP78 が関与する ERAD およびユビキチンシグナル伝達の破綻は、代謝の不均衡やプロテオトキシックストレスなどの疾患関連プロセスと関連づけられており、これらは神経変性やがん生物学の分野で頻繁に研究されている。
GP78 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Amfr 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Amfr内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Amfrの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Amfrが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。