GnT-II CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-407393
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- GnT-II CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在GnT-II基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
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GnT-II CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-407393 | 20 µg | $397.00 |
概述
MGAT2 编码 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 II（GnT-II）。GnT-II 是定位于高尔基体中部（medial-Golgi）的糖基转移酶，通过将 GlcNAc 以 β1,2 糖苷键添加到双分支（biantennary）结构的 α1,6-甘露糖支链上，催化复合型 N-聚糖合成中的关键步骤。该酶活性会影响调控受体转运、细胞—细胞黏附以及生长因子信号传导的糖蛋白成熟过程，从而塑造膜蛋白稳态（proteostasis）与细胞外相互作用。MGAT2 依赖的 N-聚糖分支与组成发生改变，已在与癌症相关的背景中被关联到细胞信号失衡以及迁移与侵袭性变化；同时也与涉及高尔基体加工受损的先天性糖基化缺陷病（CDG）有关。因此，MGAT2 常被用于糖蛋白组学、分泌通路生物学以及 N-聚糖重塑的通路层面分析研究。
GnT-II CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中MGAT2基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对MGAT2基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏MGAT2开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使GnT-II蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建MGAT2缺失的细胞模型，用于GnT-II信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 GnT-II 功能至关重要的 MGAT2 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 MGAT2 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 GnT-II CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 GnT-II CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 MGAT2 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 GnT-II HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 GnT-II HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由MGAT2同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定MGAT2靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。