Plásmido CRISPR de Activación (h) GnRHR: sc-401783-ACT

GNRHR codifica el receptor humano de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRHR), un GPCR de clase A que media las respuestas hipofisarias a la GnRH hipotalámica para regular la secreción de la hormona luteinizante y de la hormona foliculoestimulante. Tras la unión del ligando, GnRHR se acopla principalmente a Gq/11 para activar la señalización de la fosfolipasa C, promoviendo la producción de IP3/DAG, la movilización de calcio intracelular y la activación de la cascada PKC–MAPK, que moldea los programas transcripcionales de las células gonadotropas. Este eje de señalización integra la retroalimentación endocrina reproductiva y la dinámica de la estimulación pulsátil, influyendo en la diferenciación celular y en las vías de biosíntesis hormonal. La expresión o señalización desregulada de GNRHR se asocia a trastornos de la función del eje reproductivo, lo que lo convierte en un modelo útil para estudiar el tráfico de GPCR, la desensibilización y las redes de señalización endocrina.

GnRHR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNRHR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GnRHR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNRHR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNRHR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GnRHR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNRHR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GnRHR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GnRHR en células tumorales con expresión de GNRHR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.