GnRHR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401783-ACT

GNRHR codifica il recettore umano dell’ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRHR), un GPCR di classe A che media le risposte ipofisarie al GnRH ipotalamico per regolare la secrezione dell’ormone luteinizzante e dell’ormone follicolo-stimolante. In seguito al legame del ligando, GnRHR si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la segnalazione della fosfolipasi C, promuovendo la produzione di IP3/DAG, la mobilizzazione del calcio intracellulare e l’attivazione della cascata PKC–MAPK, che modella i programmi trascrizionali delle cellule gonadotrope. Questo asse di segnalazione integra il feedback endocrino riproduttivo e la dinamica della stimolazione pulsatile, influenzando la differenziazione cellulare e le vie di biosintesi ormonale. Un’alterata espressione o segnalazione di GNRHR è associata a disturbi della funzione dell’asse riproduttivo, rendendolo un modello utile per studiare il trafficking dei GPCR, la desensibilizzazione e le reti di segnalazione endocrina.

GnRHR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GNRHR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GnRHR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GNRHR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GNRHR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GnRHR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GNRHR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GnRHR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GnRHR nelle cellule tumorali con espressione di GNRHR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.