GnRH I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401425-ACT

GNRH1 codifica o hormônio liberador de gonadotrofinas I (GnRH I), um decapeptídeo hipotalâmico que inicia a sinalização endócrina reprodutiva ao estimular os gonadotrofos da hipófise anterior a secretarem o hormônio luteinizante e o hormônio folículo-estimulante. O GnRH I é produzido a partir de um pré-pró-hormônio e processado por vias secretoras reguladas, e sua liberação pulsátil coordena a função do eixo hipotálamo–hipófise–gônadas, a maturação sexual e a fertilidade. A ativação do receptor de GnRH aciona a sinalização da fosfolipase C mediada por Gq/11, com IP3/DAG a jusante, mobilização de cálcio e vias de proteína quinase que controlam a transcrição dos genes das gonadotrofinas e a dinâmica de secreção. A desregulação da sinalização de GnRH I está implicada em distúrbios do tempo da puberdade e em estados hipogonadotrópicos, sendo frequentemente estudada na regulação neuroendócrina, na biologia reprodutiva e em modelos de doenças hormônio-dependentes.

GnRH I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNRH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GnRH I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNRH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNRH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GnRH I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNRH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GnRH I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GnRH I em células tumorais com expressão de GNRH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.