GM130 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400787-NIC

GOLGA2 は、シスゴルジのマトリックスタンパク質 GM130 をコードしており、ゴルジリボンの構築と小胞の係留における中心的な足場として機能することで、ER からゴルジへの効率的な輸送やシスターナの積層を支えています。GM130 は、係留因子や低分子量 GTPase により制御される輸送ネットワークと協調して、間期におけるゴルジ装置の構造維持、および有糸分裂後のゴルジ再構築を促進し、極性分泌やオルガネラの位置決めにも影響します。膜輸送、タンパク質プロセシング、ならびに細胞周期に連動したゴルジ動態に関与することから、GM130 機能の変化は、細胞ストレス応答、遊走表現型、さらに多様な生物学的状況で報告されている疾患関連のゴルジ構造の破綻と関連しています。

GM130 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GOLGA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GOLGA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GOLGA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GOLGA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。