glypican-4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-420640-LAC-2

O gene Gpc4 de camundongo codifica a glicano-4, um proteoglicano de sulfato de heparana ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se localiza na superfície celular e na matriz extracelular para regular a distribuição de morfógenos e fatores de crescimento. A glicano-4 modula vias de sinalização, incluindo Wnt/β-catenina, FGF e BMP, ao moldar interações ligante–receptor e estabelecer gradientes que influenciam a proliferação, a diferenciação e o padrão tecidual durante o desenvolvimento. Alterações na atividade ou na expressão de Gpc4 estão associadas a sinalização extracelular desregulada e têm sido investigadas em contextos como homeostase metabólica, biologia do tecido adiposo e processos de neurodesenvolvimento, tornando-o relevante para estudos de genética de traços complexos. A edição gênica de Gpc4 em modelos murinos permite a dissecação mecanística da sinalização dependente de sulfato de heparana, da comunicação célula–célula e da regulação da matriz extracelular em diferentes fenótipos do desenvolvimento e associados a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais glypican-4 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gpc4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais glypican-4 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gpc4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de glypican-4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gpc4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.