Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Glutathione reductase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417499
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Glutathione reductase Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Glutathione reductase, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Glutathione reductase Antibody (C-10): sc-133245
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Glutathione reductase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417499 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GSR codifica la glutatione reduttasi umana, un’ossidoreduttasi dipendente da FAD che rigenera il glutatione ridotto (GSH) a partire dal glutatione ossidato (GSSG) utilizzando NADPH, mantenendo l’omeostasi redox intracellulare. Sostenendo il pool di GSH, GSR favorisce la detossificazione delle specie reattive dell’ossigeno, preserva lo stato dei tioli delle proteine e modula la segnalazione sensibile al redox nei compartimenti citosolico e mitocondriale. Questa attività si integra con le vie che producono NADPH, come la via dei pentoso fosfati, e contribuisce alle difese cellulari durante stress ossidativo, metabolico e infiammatorio. Alterazioni della funzione o dell’espressione di GSR sono spesso studiate in contesti di squilibrio redox, inclusi fenotipi emolitici, processi neurodegenerativi e adattamento delle cellule tumorali allo stress ossidativo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione reductase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GSR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GSR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GSR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Glutathione reductase.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GSR per lo studio della segnalazione di Glutathione reductase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GSR critici per la funzione di Glutathione reductase
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GSR per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GSR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Glutathione reductase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Glutathione reductase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GSR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GSR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.