Glutathione Peroxidase 7/GPX7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404694-ACT

GPX7は、グルタチオンペルオキシダーゼ7をコードしており、これは小胞体（ER）に局在するチオールペルオキシダーゼです。過酸化水素および脂質ヒドロペルオキシドの濃度を制御することで、レドックス恒常性の維持に寄与します。GPX7は、酸化によるタンパク質損傷を抑え、ジスルフィド結合形成やプロテオスタシスを支えることにより、ERストレスシグナル伝達、アンフォールドタンパク質応答（UPR）経路、さらにはより広範な抗酸化ネットワークとも機能的に関与します。GPX7活性の変化は、上皮の完全性、炎症性シグナル、細胞形質転換の文脈に影響を及ぼす、酸化ストレス駆動性の表現型と関連づけられています。レドックス調節因子としてのGPX7は、活性酸素種（ROS）がシグナル伝達や生存に影響するストレス適応、代謝関連の機能障害、腫瘍生物学のモデルにおいて、しばしば研究対象となっています。

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GPX7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GPX7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGPX7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Glutathione Peroxidase 7/GPX7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGPX7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGlutathione Peroxidase 7/GPX7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGPX7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGlutathione Peroxidase 7/GPX7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。