Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420662-ACT

O gene Gpx1 de camundongo codifica a glutationa peroxidase 1 (GPX1), uma enzima citosólica dependente de selênio que reduz o peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos lipídicos utilizando glutationa, limitando assim o dano oxidativo a proteínas, lipídios e ácidos nucleicos. A GPX1 atua no ciclo redox da glutationa e se integra a redes antioxidantes celulares que modulam a sinalização sensível a ROS, incluindo respostas ao estresse que influenciam a homeostase mitocondrial e programas inflamatórios. Alterações na atividade da GPX1 são frequentemente estudadas em contextos de biologia do estresse oxidativo, nos quais o desequilíbrio redox impacta o metabolismo, a sobrevivência celular e modelos de lesão tecidual. Em sistemas murinos, a modulação de Gpx1 também é usada para investigar como a capacidade antioxidante afeta a suscetibilidade a fenótipos de doenças neurodegenerativas, cardiovasculares e inflamatórias, sem implicar desfechos clínicos.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpx1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpx1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpx1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 1/GPX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpx1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 1/GPX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 1/GPX1 em células tumorais com expressão de Gpx1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.