Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400631-ACT

GPX1 codifica a glutationa peroxidase 1, uma selenoenzima citosólica que reduz o peróxido de hidrogénio e hidroperóxidos orgânicos utilizando glutationa, limitando assim os danos oxidativos em proteínas, lípidos e DNA. Ao controlar o estado redox intracelular, a GPX1 influencia a sinalização por espécies reativas de oxigénio, o metabolismo da glutationa e vias responsivas ao stress que moldam a função mitocondrial, a apoptose e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão ou atividade da GPX1 têm sido associadas a fenótipos de stress oxidativo observados em estudos de biologia do cancro, neurodegeneração, disfunção metabólica e investigação cardiovascular. Como enzima antioxidante amplamente expressa, a GPX1 constitui um ponto de referência útil para dissecar como a homeostase redox modula decisões de destino celular e respostas adaptativas ao stress.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 1/GPX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 1/GPX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 1/GPX1 em células tumorais com expressão de GPX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.