GluR-δ2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403400-NIC

GRID2 codifica il recettore del glutammato delta-2 (GluR-δ2), un membro della famiglia dei recettori ionotropici del glutammato fortemente arricchito nei neuroni di Purkinje del cervelletto e che funziona principalmente come organizzatore sinaptico, piuttosto che come un canale canonico attivato da ligando. GluR-δ2 partecipa a complessi di segnalazione trans-sinaptici che regolano la formazione delle sinapsi tra fibre parallele e cellule di Purkinje, il mantenimento sinaptico e la plasticità dipendente dall’attività, influenzando vie intracellulari legate al rimodellamento delle spine dendritiche e alla depressione a lungo termine. Un’alterazione della funzione o dell’espressione di GRID2 è associata a una disorganizzazione dei circuiti cerebellari ed è stata implicata in fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi caratterizzati da compromissione della coordinazione motoria e atassia. Di conseguenza, GRID2 è spesso studiato nei meccanismi della sinaptogenesi, della specificazione delle sinapsi eccitatorie e della fisiologia delle reti cerebellari.

GluR-δ2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRID2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRID2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRID2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRID2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.