GluR-δ2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403400-NIC

GRID2 codifica o receptor de glutamato delta-2 (GluR-δ2), um membro da família de receptores ionotrópicos de glutamato altamente enriquecido em neurónios de Purkinje do cerebelo e que funciona principalmente como um organizador sináptico, e não como um canal canónico ativado por ligando. O GluR-δ2 participa em complexos de sinalização trans-sináptica que regulam a formação de sinapses entre fibras paralelas e células de Purkinje, a manutenção sináptica e a plasticidade dependente da atividade, influenciando vias intracelulares ligadas à remodelação de espinhas dendríticas e à depressão de longa duração. Alterações na função ou na expressão de GRID2 estão associadas a perturbações dos circuitos cerebelares e têm sido implicadas em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos caracterizados por coordenação motora comprometida e ataxia. Por isso, o GRID2 é frequentemente estudado em mecanismos de sinaptogénese, especificação de sinapses excitatórias e fisiologia de redes cerebelares.

GluR-δ2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GRID2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GRID2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GRID2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GRID2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.