GluR-3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-424739-NIC

Gria3は、マウス中枢神経系における高速な興奮性神経伝達を担うリガンド作動性イオンチャネルであるAMPA型グルタミン酸受容体サブユニットGluR-3をコードしています。GluR-3を含む受容体は、活動依存的なトラフィッキングやリン酸化を介してシナプス伝達と可塑性を調節し、長期増強（LTP）や樹状突起スパインの再構築などの過程を形作ります。Na⁺/K⁺のコンダクタンスと、それに続くCa²⁺依存性シグナル伝達を制御することで、GRIA3はMAPK/ERK、CaMKII、さらに神経活動を転写応答へ結び付ける即時早期遺伝子（IEG）プログラムなどの経路と交差します。AMPA受容体の構成やシグナル伝達の変化は、神経発達および神経精神疾患関連の表現型や、興奮毒性ストレス応答への関与が示唆されており、Gria3は回路機能の機序研究に有用な標的となります。

GluR-3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Gria3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Gria3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Gria3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Gria3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。