GLUD1CRISPR激活质粒(h): sc-402187-ACT

人类 GLUD1 基因编码线粒体谷氨酸脱氢酶 1（mitochondrial glutamate dehydrogenase 1），这是一种 NAD(P)+ 依赖性酶，催化谷氨酸可逆的氧化脱氨反应，生成 α-酮戊二酸和氨，从而将氨基酸分解代谢与三羧酸（TCA）循环连接起来。通过调控谷氨酸利用与补充代谢（anaplerotic）通量之间的平衡，GLUD1 影响细胞生物能量学、氧化还原稳态以及氮代谢，并对神经递质库和代谢耦联产生下游影响。GLUD1 的活性与调控线粒体功能和代谢信号传导的通路相互衔接，而其调控异常与涉及氨基酸处理和神经内分泌代谢失衡的疾病有关。这些特性使 GLUD1 成为研究线粒体代谢机制以及谷氨酸依赖性细胞表型的一个重要靶点。

GLUD1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GLUD1的表达。

GLUD1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GLUD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GLUD1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GLUD1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GLUD1位点，并能够研究内源性位点上依赖于GLUD1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GLUD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GLUD1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。