Glucosidase IIβ Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404394-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Glucosidase IIβO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Glucosidase IIβ (h) e o Plasmídeo Double Nickase Glucosidase IIβ (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PRKCSH. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Glucosidase IIβ Anticorpo (H-4): sc-374457
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Glucosidase IIβ Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIβ Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O PRKCSH codifica a subunidade β da glicosidase II, um complexo enzimático luminal do retículo endoplasmático (RE) que remove resíduos de glicose de glicanos ligados a N durante a maturação de glicoproteínas. Essa etapa de processamento dá suporte ao ciclo de controle de qualidade mediado por calnexina/calreticulina e ajuda a coordenar a degradação associada ao RE (ERAD) de proteínas mal dobradas, ligando a função do PRKCSH à proteostase e à sinalização da resposta a proteínas mal dobradas. A interrupção da atividade da glicosidase IIβ pode comprometer a secreção e a expressão de glicoproteínas na superfície celular, alterando a sinalização celular e a adaptação ao estresse. Variações genéticas em PRKCSH têm sido associadas à doença hepática policística autossômica dominante, o que o torna relevante para estudos de biologia epitelial, estresse de organelas e vias dependentes de glicoproteínas.
Glucosidase IIβ O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PRKCSH em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PRKCSH. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PRKCSH. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PRKCSH interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.