Glucosidase I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405014

Visão geral

MOGS codifica a glicosidase I, uma enzima localizada no lúmen do retículo endoplasmático (RE) que dá início ao processamento de glicanos ligados a N ao remover a glicose terminal ligada por α-1,2 de Glc₃Man₉GlcNAc₂ em glicoproteínas recém-sintetizadas. Essa etapa inicial de “trimming” coordena a entrada no ciclo de controle de qualidade calnexina/calreticulina, influenciando o dobramento proteico, a degradação associada ao RE e a maturação da via secretora. A interrupção de MOGS desorganiza a proteostase e altera a composição de glicoproteínas na superfície celular e em proteínas secretadas, com efeitos a jusante no tráfego de receptores e no reconhecimento imunológico. Variação genética ou perda funcional da glicosidase I tem sido associada a distúrbios congênitos da glicosilação e a fenótipos mais amplos ligados ao estresse do RE, tornando-a relevante para o estudo de processos celulares dependentes de glicoproteínas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Glucosidase I (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MOGS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MOGS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MOGS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Glucosidase I.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MOGS para a investigação da sinalização de Glucosidase I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MOGS críticos para a função Glucosidase I
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MOGS para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Glucosidase I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Glucosidase I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MOGS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Glucosidase I Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Glucosidase I (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MOGS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MOGS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.