Glucose Transporter Glut8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403183-ACT

SLC2A8 codifica o transportador facilitador de glicose GLUT8, um carreador associado a compartimentos intracelulares e à membrana plasmática que contribui para a captação e a redistribuição de hexoses em células metabolicamente ativas. O GLUT8 sustenta a homeostase energética celular ao regular a disponibilidade de glicose para a glicólise, o metabolismo do glicogênio e programas mais amplos de detecção de nutrientes, integrando-se a vias que coordenam a responsividade à insulina e o tráfego de organelas. Alterações na expressão ou na localização de SLC2A8 têm sido investigadas em contextos de desregulação metabólica, respostas ao estresse oxidativo e utilização de combustível específica de tecidos. Na pesquisa biomédica, o GLUT8 é usado para investigar como a abundância e a compartimentalização de transportadores influenciam o crescimento e a diferenciação celular, bem como a preferência por substratos.

Glucose Transporter Glut8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC2A8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glucose Transporter Glut8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC2A8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC2A8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glucose Transporter Glut8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC2A8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glucose Transporter Glut8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glucose Transporter Glut8 em células tumorais com expressão de SLC2A8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.