Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glucose Transporter Glut1: sc-400174-ACT

SLC2A1 code le transporteur de glucose 1 (GLUT1), un transporteur membranaire facilitateur qui assure l’absorption basale de glucose à travers la membrane plasmique et soutient le flux glycolytique dans des conditions nutritionnelles variées. L’activité de GLUT1 est étroitement liée à l’homéostasie énergétique, au métabolisme répondant à l’hypoxie et à l’entrée du carbone dans des voies biosynthétiques telles que la voie des pentoses phosphates, impliquée dans le contrôle du rédox et la production de nucléotides. La régulation de SLC2A1 recoupe des programmes de signalisation et de transcription, notamment des réponses dépendantes de HIF-1 et, plus largement, le remodelage métabolique en situation de stress cellulaire. Les modifications de l’expression de GLUT1 et de l’utilisation du glucose sont largement étudiées dans des contextes de dysfonction métabolique et de remodelage prolifératif, offrant un levier mécanistique pour explorer des phénotypes dépendants du transport des nutriments.

Glucose Transporter Glut1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC2A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glucose Transporter Glut1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC2A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC2A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC2A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glucose Transporter Glut1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glucose Transporter Glut1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC2A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.