GLP-1R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400847-ACT

GLP1R codifica o receptor do peptídeo semelhante ao glucagon-1 (GLP-1R), um GPCR de classe B que se acopla principalmente à proteína Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar as vias de sinalização mediadas por PKA e EPAC. Em células β pancreáticas, a sinalização do GLP-1R potencializa a secreção de insulina estimulada pela glicose e modula programas gênicos ligados ao sensoriamento de nutrientes e à capacidade secretória, enquanto em tecidos extra-pancreáticos influencia circuitos regulatórios neuronais e gastrointestinais. A conversa cruzada entre vias a jusante pode envolver transcrição dependente de CREB, sinalização PI3K–AKT e processos dependentes de cálcio que moldam a excitabilidade celular e a secreção. Alterações na expressão ou na sinalização de GLP1R têm sido estudadas no contexto de desregulação metabólica, incluindo fenótipos associados a diabetes e obesidade, bem como respostas de estresse das células β.

GLP-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLP1R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLP-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLP1R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLP1R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLP-1R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLP1R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLP-1R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLP-1R em células tumorais com expressão de GLP1R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.