GLI-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420577

概要

Gli3は、亜鉛フィンガー型転写因子であるGLI-3をコードしており、Hedgehogシグナル伝達において状況依存的に転写活性化因子または抑制因子として機能し、一次繊毛からのシグナルを統合して発生に関わる遺伝子発現プログラムを制御します。マウスでは、GLI-3はPTCH1/SMO下流の転写出力を制御し、さらにGLIファミリーの活性を調節することで、四肢、神経管、頭蓋顔面構造のパターニングに重要な役割を果たします。GLI-3のタンパク質分解によるプロセシングや翻訳後修飾による調節は、胚発生過程におけるモルフォゲン勾配の形成や境界の形成に寄与します。Gli3活性の制御異常は先天性奇形の表現型と関連しており、Hedgehog依存的な組織恒常性や腫瘍化に伴う経路の再配線を解析するモデルとしてもしばしば用いられます。

GLI-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGli3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gli3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gli3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GLI-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GLI-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gli3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GLI-3の機能に不可欠なGli3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gli3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GLI-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGLI-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gli3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GLI-3 HDRプラスミド（m）および GLI-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGli3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGli3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。