GlcAT-S Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408633

Visão geral

B3GAT2 codifica a glucuroniltransferase S (GlcAT-S), uma glicosiltransferase residente no aparelho de Golgi que transfere ácido glucurônico para aceitadores específicos de carboidratos durante a maturação dos glicanos. Essa atividade contribui para a biossíntese e a remodelação de glicoconjugados da superfície celular e da matriz extracelular, influenciando o processamento de glicoproteínas, as estruturas de carboidratos associadas a proteoglicanos e, de forma mais ampla, programas de sinalização e adesão dependentes de glicosilação. Ao moldar a composição dos glicanos, a GlcAT-S pode modular a organização de receptores, as interações célula–célula e eventos de ligação à matriz que são centrais para a homeostase tecidual e a diferenciação celular. Vias de glicosilação desreguladas envolvendo B3GAT2 têm sido investigadas no contexto de alterações na comunicação celular e em respostas ao estresse relevantes para múltiplos fenótipos associados a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GlcAT-S (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene B3GAT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do B3GAT2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do B3GAT2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GlcAT-S.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de B3GAT2 para a investigação da sinalização de GlcAT-S, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) B3GAT2 críticos para a função GlcAT-S
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos B3GAT2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GlcAT-S Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GlcAT-S Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus B3GAT2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GlcAT-S Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GlcAT-S (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia B3GAT2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo B3GAT2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.