GILT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404810-ACT

A proteína 30 induzível por interferon gama (IFI30), também conhecida como redutase tiol lisossomal induzível por interferon gama (GILT), é uma enzima lisossomal que catalisa a redução de pontes dissulfeto para facilitar o processamento de antígenos internalizados para apresentação por MHC de classe II. Ao promover a geração de peptídeos no compartimento endo-lisossomal, a IFI30 sustenta a ativação da imunidade adaptativa e se articula com programas de sinalização inata impulsionados por interferons. A atividade da IFI30 contribui para a proteostase dependente de redox durante o processamento de antígenos e pode influenciar a comunicação entre células imunes em microambientes inflamatórios. Alterações no processamento de antígenos e estados transcricionais associados a interferon que envolvem a IFI30 são frequentemente estudados em contextos de inflamação crônica, biologia de infecções e imunologia tumoral.

GILT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFI30 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GILT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFI30 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFI30, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GILT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFI30 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GILT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GILT em células tumorais com expressão de IFI30 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.