GHS-R1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401724-NIC

GHSRは成長ホルモン分泌促進因子受容体1（GHS-R1）をコードしており、食欲、エネルギー恒常性、神経内分泌シグナル伝達を調節する、グレリン応答性のクラスA GPCRです。リガンド結合により、GHS-R1は主としてGq/11に共役してホスホリパーゼCを活性化し、細胞内Ca2+濃度を上昇させ、MAPK/ERKシグナル伝達を調節します。さらに、細胞の状況によってはGi/o依存性経路へのバイアスも示します。この受容体は、視床下部および下垂体回路に加えて末梢組織でも広く研究されており、代謝シグナルを成長ホルモン分泌や自律神経性の出力と統合する役割を担います。GHSRシグナルの調節異常は、肥満関連表現型、インスリン感受性、報酬系およびストレス関連経路の変化に関与するとされ、代謝および神経精神疾患研究モデルにおける重要性を支持しています。

GHS-R1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GHSR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GHSR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GHSRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GHSRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。