GH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401171-ACT

O GH2 humano codifica o hormônio do crescimento (GH), um hormônio peptídico de origem hipofisária que regula o crescimento somático pós-natal e a homeostase metabólica. A sinalização do GH é mediada principalmente pelo receptor do hormônio do crescimento e pela atividade a jusante de JAK2/STAT5, com modulação adicional das vias MAPK e PI3K/AKT para coordenar programas de expressão gênica envolvidos na síntese proteica, lipólise e utilização de glicose. Por meio da indução de componentes do eixo IGF e de reguladores metabólicos, a atividade do GH2 influencia o crescimento tecidual, a partição de nutrientes e circuitos de retroalimentação endócrina. A biologia do GH desregulada é relevante para distúrbios de crescimento e composição corporal e é frequentemente investigada em modelos de pesquisa endócrina, metabólica e do desenvolvimento.

GH-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GH2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GH-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GH2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GH2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GH-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GH2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GH-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GH-2 em células tumorais com expressão de GH2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.