Ggnbp2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432161-ACT

O Ggnbp2 (gametogenetin-binding protein 2) de camundongo codifica uma proteína associada ao núcleo, implicada na biologia das células germinativas e na espermatogênese, com enriquecimento descrito em testículo e funções relacionadas à regulação da cromatina e ao controle transcricional durante a meiose masculina. Sua atividade é relevante para programas celulares que governam a diferenciação das células germinativas, a integridade do genoma e a maturação das espermátides, processos que dependem de reparo de DNA coordenado e de remodelamento epigenético. A perturbação da expressão de Ggnbp2 tem sido associada a defeitos em fenótipos de fertilidade masculina em sistemas experimentais, sustentando seu uso como marcador e modulador em estudos de biologia reprodutiva. Assim, o Ggnbp2 é de interesse para investigar redes regulatórias subjacentes ao desenvolvimento da linhagem germinativa e à expressão gênica específica do testículo.

Ggnbp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ggnbp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ggnbp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ggnbp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ggnbp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ggnbp2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ggnbp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ggnbp2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ggnbp2 em células tumorais com expressão de Ggnbp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.