GGCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407037

Visão geral

GGCX (gama-glutamil carboxilase) é uma enzima de membrana do retículo endoplasmático que catalisa a γ-carboxilação de resíduos de glutamato dependente de vitamina K, gerando domínios Gla necessários para a ligação ao cálcio. Essa modificação pós-traducional é essencial para a maturação e a atividade de múltiplas proteínas secretadas, incluindo fatores de coagulação e outras proteínas dependentes de vitamina K, vinculando a GGCX à hemostasia, à função de proteínas extracelulares e à ciclagem redox na via da vitamina K. A atividade da GGCX também se relaciona ao processamento de proteínas no RE e ao controle de qualidade da via secretória, pois a carboxilação adequada influencia o dobramento proteico e a eficiência de secreção. A disrupção genética ou a função alterada de GGCX tem sido associada a fenótipos hemorrágicos e a disfunções mais amplas de proteínas dependentes de vitamina K, tornando-a um alvo útil para estudar a biologia relacionada à coagulação e a regulação pós-traducional ligada ao RE.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GGCX (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GGCX em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GGCX, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GGCX na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GGCX.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GGCX para a investigação da sinalização de GGCX, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GGCX críticos para a função GGCX
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GGCX para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GGCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GGCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GGCX. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GGCX Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GGCX (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GGCX para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GGCX definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.