Gfi-1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403883-ACT

GFI1B codifica o repressor transcricional Gfi-1B, uma proteína com dedos de zinco essencial para o desenvolvimento hematopoético e para a especificação de linhagens, particularmente nos programas eritroide e megacariocítico. Por meio de interações com complexos modificadores de cromatina, como LSD1/RCOR/HDAC, o Gfi-1B molda redes transcricionais que governam a proliferação, a diferenciação e a maturação de progenitores. Sua atividade se integra a reguladores hematopoéticos centrais para controlar programas de expressão gênica envolvidos na formação de plaquetas e no desenvolvimento de hemácias. A expressão ou função desregulada de GFI1B tem sido associada a distúrbios plaquetários hereditários e a perturbações mais amplas da homeostase hematopoética, relevantes para pesquisas sobre malignidades de células sanguíneas.

Gfi-1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GFI1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gfi-1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GFI1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GFI1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gfi-1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GFI1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gfi-1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gfi-1B em células tumorais com expressão de GFI1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.