Plásmido CRISPR de Activación (m) Gfi-1: sc-420535-ACT

El gen murino **Gfi1** codifica el represor transcripcional con dedos de zinc **Gfi-1**, un regulador clave de los programas de células madre y progenitoras hematopoyéticas que moldea el compromiso de linaje y la maduración en los compartimentos sanguíneo e inmunitario. Gfi-1 actúa mediante la unión al ADN y el reclutamiento de complejos correpresores, influyendo en el estado de la cromatina y en redes transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. Interactúa con vías que regulan la señalización sensible a citocinas y el desarrollo mieloide/linfoide, por lo que se estudia ampliamente en los mecanismos de homeostasis inmunitaria. La actividad desregulada de Gfi-1 se ha vinculado con hematopoyesis aberrante y circuitos transcripcionales leucemogénicos, lo que respalda su uso como diana de investigación en modelos de desarrollo sanguíneo y enfermedades hematológicas.

Gfi-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gfi1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gfi-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gfi1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gfi1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gfi-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gfi1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gfi-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gfi-1 en células tumorales con expresión de Gfi1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.