Gfi-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-401315-ACT-2

O GFI1 humano codifica o repressor transcricional com dedos de zinco Gfi-1, um fator nuclear que se liga a motivos específicos de DNA e recruta complexos correpressores para modular a cromatina e restringir programas de expressão gênica. O Gfi-1 é um regulador-chave do destino de células-tronco e progenitoras hematopoéticas, influenciando a diferenciação granulocítica e linfoide, a apoptose e o controle do ciclo celular por meio de redes transcricionais que interagem com a sinalização Notch, vias induzidas por citocinas e reguladores epigenéticos, como as desacetilases de histonas. A expressão desregulada ou mutações em GFI1 têm sido associadas à hematopoese aberrante e à disfunção imune, e o gene é recorrentemente implicado na leucemogênese e em outras reprogramações transcricionais relacionadas a malignidades. A edição gênica de GFI1 apoia estudos mecanísticos sobre o comprometimento de linhagem, a regulação de enhancers/promotores e a identificação de alvos em escala genômica (por exemplo, integração de ChIP-seq/RNA-seq) em modelos celulares humanos relevantes.

Gfi-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GFI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gfi-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GFI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GFI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gfi-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GFI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gfi-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gfi-1 em células tumorais com expressão de GFI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.