Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432743

概要

マウスGsnは、Ca2+によって制御されるアクチン結合タンパク質であるゲルゾリンをコードしており、アクチンフィラメントを切断し、キャップし、核形成することで細胞骨格の再編成を制御します。アクチン動態を調節することにより、ゲルゾリンは細胞形態の変化、細胞運動、エンドサイトーシス、ならびに貪食に寄与し、さらにホスホイノシチド調節やRhoファミリーGTPアーゼ関連経路など、膜からのシグナルをアクチン再構成へと結び付けるシグナル伝達ネットワークとも連携します。ゲルゾリンの活性や発現の変化は、細胞移動の制御異常、炎症応答、組織リモデリングの異常と関連づけられており、細胞骨格に駆動される表現型を研究するうえで有用な結節点となります。マウス系では、Gsnの改変は血管生物学、神経生物学、免疫細胞機能に関わるアクチン依存的プロセスの機序研究を支えます。

Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGsn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gsn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gsnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gelsolinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gelsolinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gsn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gelsolinの機能に不可欠なGsnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gsnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gsn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gelsolin HDRプラスミド（m）および Gelsolin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGsnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGsn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。