Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) GDF-8: sc-400693-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GDF-8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GDF-8 (h) y el plásmido de doble nickasa GDF-8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MSTN. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GDF-8 Anticuerpo (1L4): sc-134345
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GDF-8 | sc-400693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GDF-8 | sc-400693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MSTN codifica el factor de diferenciación del crecimiento 8 (GDF-8, miostatina), un ligando secretado de la superfamilia TGF-β que limita el crecimiento del músculo esquelético al restringir la proliferación y la diferenciación de los mioblastos. GDF-8 señaliza principalmente a través de receptores de activina tipo II para activar programas transcripcionales dependientes de SMAD2/3 y establece conexiones con las vías PI3K–AKT–mTOR y ubiquitina–proteasoma, que regulan la síntesis y la degradación de proteínas. La actividad alterada de MSTN/GDF-8 se ha asociado con fenotipos de hipertrofia muscular o de atrofia y se estudia con frecuencia en el contexto de la sarcopenia, la caquexia, modelos de distrofia muscular y la regulación metabólica. In vitro, la perturbación de MSTN ayuda a dilucidar mecanismos de miogénesis, señalización extracelular y remodelación del tipo de fibra en células humanas.
GDF-8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MSTN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MSTN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MSTN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MSTN alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.