Plasmide CRISPR d'Activation (h) GDF-11: sc-400969-ACT

Le facteur de différenciation de croissance 11 (GDF11 ; GDF-11) est un ligand sécrété de la superfamille TGF-β qui transmet son signal via les récepteurs de type II et de type I de l’activine afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD2/3. Dans les cellules humaines, GDF11 régule la mise en place des plans de développement, les décisions de destinée cellulaire et l’homéostasie tissulaire, avec des effets en aval sur la prolifération, la différenciation et le remodelage de la matrice extracellulaire. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GDF11 ont été étudiées dans des contextes impliquant le remodelage musculaire et cardiaque, des processus neurodéveloppementaux et des voies pertinentes pour le cancer telles que la transition épithélio-mésenchymateuse et les interactions avec le stroma. En tant que facteur circulant de type morphogène, GDF11 est également utilisé pour étudier la dynamique de la signalisation paracrine et les interactions (crosstalk) entre voies médiées par des récepteurs.

GDF-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GDF11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GDF-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GDF11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GDF11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GDF-11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GDF11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GDF-11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GDF-11 dans les cellules tumorales présentant une expression de GDF11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.