GCSH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406784

概要

GCSHは、グリシン開裂系のHタンパク質をコードしており、ミトコンドリアに存在するリポ酸結合型のキャリアとして、グリシン脱炭酸酵素（Pタンパク質）、アミノメチル基転移酵素（Tタンパク質）、ジヒドロリポアミド脱水素酵素（Lタンパク質）の間で反応中間体を受け渡します。この多酵素複合体を介して、GCSHはグリシン分解を葉酸依存的な炭素単位の転移と共役させ、グリシン異化とワンカーボン代謝を支えることで、ミトコンドリアでのアミノ酸代謝回転を細胞のレドックス状態および代謝恒常性と結び付けています。グリシン開裂活性の撹乱は、ミトコンドリア機能の変化やグリシン／セリンフラックスの不均衡と関連し、これらは神経代謝の調節異常に関わる過程として重要です。リポ酸依存性酵素反応と葉酸介在経路をつなぐ結節点として、GCSHはミトコンドリア代謝、酸化ストレス応答、ならびにグリシン取り扱いに関わる先天代謝異常の文脈でしばしば研究されています。

GCSH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGCSH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GCSH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GCSHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCSHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCSHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GCSH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCSHの機能に不可欠なGCSHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GCSHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCSH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGCSH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GCSH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCSH HDRプラスミド（h）および GCSH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGCSHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGCSH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。