GCSFR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402269-ACT

CSF3R codifica o receptor humano do fator estimulador de colônias de granulócitos (GCSFR), um receptor de citocinas de classe I que controla o comprometimento da linhagem neutrofílica, a diferenciação granulocítica e a sobrevivência em células hematopoéticas. A ativação do receptor induzida pelo ligante aciona a sinalização JAK/STAT — especialmente STAT3 e STAT5 — e faz interface com as vias MAPK/ERK e PI3K/AKT para coordenar a proliferação e a maturação funcional. A sinalização desregulada de CSF3R e variantes do receptor têm sido associadas a alterações na homeostase de células mieloides e à granulopoiese aberrante, tornando esse eixo relevante para estudos de programas de diferenciação mieloide e da dinâmica de células inflamatórias. Como receptor de superfície com saídas transcricionais downstream bem definidas, o GCSFR é um ponto útil para mapeamento mecanístico de vias e análises de redes transcricionais em modelos de pesquisa em imunologia e hematologia.

G-CSFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSF3R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G-CSFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSF3R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSF3R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G-CSFR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSF3R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G-CSFR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G-CSFR em células tumorais com expressão de CSF3R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.