GCNT4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412177-ACT

GCNT4 (transferase 4 de glucosaminil (N-acetil)) codifica uma glicosiltransferase residente no Golgi que catalisa a ramificação β1,6-N-acetilglucosamina em O-glicanos do tipo mucina, moldando a estrutura e a abundância de glicoconjugados complexos na superfície celular e em mucinas secretadas. Ao modular a ramificação dos glicanos, a GCNT4 influencia o tráfego de glicoproteínas, as interações recetor–ligando e a sinalização mediada por lectinas, com efeitos a jusante na diferenciação epitelial, na função de barreira e na adesão célula–célula. Programas alterados de O-glicosilação estão frequentemente associados a mudanças no reconhecimento imunitário e a fenótipos de glicanos associados a tumores, tornando a GCNT4 um ponto relevante para estudar a remodelação dependente de glicosilação em contextos de doença. Investigadores interrogam frequentemente a atividade da GCNT4 em vias que regem a biossíntese de mucinas, a ramificação de glicanos e a maturação de glicoproteínas de membrana.

GCNT4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCNT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCNT4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCNT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCNT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCNT4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCNT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCNT4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCNT4 em células tumorais com expressão de GCNT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.