GCNT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410791-ACT

O GCNT1 humano codifica uma glicosiltransferase residente no complexo de Golgi que catalisa a formação de O-glicanos core 2 e core 4 ao ramificar estruturas de N-acetilgalactosamina ligadas por O, moldando assim os padrões de glicosilação do tipo mucina em proteínas de superfície celular e secretadas. Ao remodelar a arquitetura dos glicanos, o GCNT1 influencia o reconhecimento célula–célula, a apresentação de ligantes de selectinas e o tráfego de células imunes, além de poder modular microambientes de sinalização ao alterar glicoformas de receptores e mucinas. A atividade do GCNT1 contribui para a maturação de glicoproteínas epiteliais e hematopoéticas e é frequentemente estudada no contexto de adesão, inflamação e regulação imune. A O-glicosilação dependente de GCNT1, quando desregulada, tem sido associada a assinaturas de glicanos alteradas em tumores e a mudanças relevantes para doenças nos fenótipos de interação celular.

GCNT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCNT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCNT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCNT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCNT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCNT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCNT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCNT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCNT1 em células tumorais com expressão de GCNT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.