Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCM2: sc-404318-ACT

GCM2 (glial cells missing homolog 2) est un facteur de transcription essentiel au développement des glandes parathyroïdes et au maintien des programmes d’expression génique spécifiques des parathyroïdes. Dans les cellules humaines, GCM2 régule la différenciation et l’identité endocrine en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui contrôlent l’homéostasie calcium–phosphate, notamment des voies influençant la production et la sécrétion de l’hormone parathyroïdienne. Une activité dérégulée de GCM2 a été associée à des troubles héréditaires et sporadiques de la fonction parathyroïdienne, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la spécification des lignages endocriniens et le métabolisme des ions minéraux. En tant que régulateur nucléaire se liant à l’ADN, GCM2 est également utilisé pour explorer des circuits transcriptionnels dépendants du contexte dans des modèles pertinents pour le développement et les maladies.

GCM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCM2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCM2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCM2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCM2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GCM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.