GBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401778-ACT

ヒトGBP1（グアニレート結合タンパク質1）は、インターフェロン誘導性の大型GTPアーゼであり、JAK–STATシグナル伝達の下流で抗菌作用および炎症性のエフェクターとして機能する。GBP1は細胞内膜や病原体を含む区画に局在し、インフラマソーム関連応答、微生物複製の抑制、ならびに細胞骨格・小胞輸送過程の調節などを含む細胞自律性免疫を制御する。インターフェロン刺激遺伝子（ISG）ネットワークにおける役割を通じて、GBP1は抗原提示やサイトカイン駆動性シグナル伝達に影響する自然免疫の転写プログラム形成にも寄与する。GBP1発現の異常はインターフェロン活性亢進の指標としてしばしば用いられ、さまざまな疾患状況において炎症性病態生物学や腫瘍免疫微小環境の状態と関連づけられている。

GBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。