GBDR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409781

概要

UBAC1（GBDR1としても報告）は、ユビキチン結合（UBA）ドメインを有するタンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質品質管理およびタンパク質ターンオーバーの制御に関与すると考えられています。ユビキチン化基質を認識し、ユビキチン・プロテアソーム系（UPS）と連携することで、UBAC1は経路構成要素の制御された分解を介して、プロテオスタシス、ストレス応答、シグナル伝達ダイナミクスを司る経路に影響を及ぼし得る位置づけにあります。ユビキチン化ネットワークの破綻は、異常な炎症性シグナル、細胞周期制御の変化、ならびに神経変性や腫瘍化プロセスと広く関連していることから、UBAC1/GBDR1はユビキチン介在性制御の機構研究における重要なノードとなります。UBAC1の機能を解析することで、平常時およびストレス条件下において、ユビキチン認識と輸送が経路の堅牢性にどのように寄与するかを明らかにする助けとなります。

GBDR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBAC1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBAC1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBAC1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GBDR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GBDR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBAC1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GBDR1の機能に不可欠なUBAC1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBAC1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GBDR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGBDR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBAC1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GBDR1 HDRプラスミド（h）および GBDR1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBAC1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBAC1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。