GATA-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420498-ACT

O gene Gata6 do camundongo codifica o fator de transcrição com dedo de zinco GATA-6, um regulador determinante de linhagem do desenvolvimento endodérmico e da diferenciação epitelial em tecidos como pulmão, pâncreas, intestino e coração. O GATA-6 liga-se a motivos GATA em intensificadores (enhancers) e promotores para coordenar programas gênicos envolvidos em morfogênese, especificação do destino celular e manutenção de estados diferenciados, muitas vezes integrando-se a redes de sinalização associadas a Wnt, BMP/TGF-β, FGF e Notch. Na biologia do adulto, a atividade alterada de GATA-6 está ligada a processos desregulados de diferenciação e remodelamento que afetam a homeostase de órgãos e as respostas ao estresse. Padrões de expressão aberrantes têm sido estudados em contextos como malformações congênitas e reprogramação transcricional oncogênica, tornando Gata6 um nó útil para investigações mecanísticas de circuitos regulatórios gênicos relevantes para desenvolvimento e doença.

GATA-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gata6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GATA-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gata6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gata6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GATA-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gata6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GATA-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GATA-6 em células tumorais com expressão de Gata6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.