GATA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420494

概要

Gata2は、マウスにおける造血幹細胞および前駆細胞の維持と系譜プライミングを司る中心的制御因子である亜鉛フィンガー型転写因子GATA-2をコードする。GATA-2はGATAモチーフに結合して、自己複製、静止期、分化を制御する転写ネットワークを統括し、サイトカインシグナル伝達プログラムや、RUNX1、TAL1、SPI1/PU.1といった主要な造血制御因子とも機能的に交差する。造血に加えて、GATA-2は血管およびリンパ管の発生や内皮細胞の遺伝子プログラムにも寄与する。Gata2活性の破綻は、異常な造血発生や免疫細胞ホメオスタシスの乱れと関連しており、血液形成の機構や関連する病態生理を研究するうえで有用な結節点となる。

GATA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGata2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gata2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gata2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GATA-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GATA-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gata2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GATA-2の機能に不可欠なGata2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gata2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GATA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGATA-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gata2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GATA-2 HDRプラスミド（m）および GATA-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGata2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGata2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。